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    小鼠ELISA試劑盒操作步驟

     更新時間:2019-03-18 點擊量:1042
      小鼠ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠甲狀旁腺素(PTH)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠甲狀旁腺素(PTH)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

    小鼠ELISA試劑盒


     
      小鼠ELISA試劑盒樣本處理及要求
     
      1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
     
      2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
     
      3. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
     
      注:標本溶血會影響后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
     
      小鼠ELISA試劑盒操作步驟
     
      1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
     
      2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
     
      3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
     
      4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
     
      5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
     
      6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
     
      7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
     
      實驗結果計算
     
      以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
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