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                雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒實驗原理及操作步驟

                 更新時間:2019-09-27 點擊量:1174

                雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒實驗原理及操作步驟

                雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒實驗原理

                    本試劑盒系由預包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體。實驗時,在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,經溫育后,若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶結合物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體。

                 

                雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒檢驗方法

                1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。

                2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

                3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

                4.混勻,置37℃反應30分鐘。

                5.扣去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。

                6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。

                7.洗滌,同步驟5。

                8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。

                9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。

                 

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