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    來看一看昆蟲ELISA試劑盒使用流程和你知道的是否一致

     更新時間:2021-10-26 點擊量:821
       昆蟲ELISA試劑盒使用流程:
      1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列方式在小試管中進行稀釋。
      400ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
      200ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
      100ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
      50ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
      25ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
      2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
      3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
      4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
      5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
      6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
      7.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
      8.洗滌:揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
      9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
      10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
      11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
      12.計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
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