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                ELISA試劑盒內源性物質使用說明

                 更新時間:2019-05-21 點擊量:832
                   血清是較為常用的標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致,ELISA試劑盒分為內源性物質和外源性物質兩種,其中內源性物質又分為:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。
                 ?。?)類風濕因子
                  人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,從而導致假陽性。
                       解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標本用聯有熱變性(63℃,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
                 ?。?)補體
                  ELISA系統中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發生變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q可以將二者連接起來,從而造成假陽性。
                       解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10min或56℃,30min加熱血清使C1q滅活。
                 ?。?)嗜異性抗體
                  人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s)結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時無效。
                 ?。?)醫源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體
                  人ELISA試劑盒臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術,均有可能使這些病人體內產生抗鼠抗體;另外,被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠Ig(s)抗體。這些病人ELISA測定時均可產生假陽性。
                       解決的辦法是:測定抗原時,在標本中加入足量的正常鼠Ig(s),從而克服由于上述原因造成的假陽性。
                 ?。?)嗜靶抗原的自身抗體
                  抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,ELISA試劑盒有時能與靶抗原結合形成復合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現,解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。
                 ?。?)標本中其它成分的影響血清脂質過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對ELISA測定結果有干擾作用。
                 ?。?)交叉反應物質
                  類di高辛、類AFP樣物質等,是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時,也會出現假陽性結果。
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