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                禽liu感病毒H5/H9亞型(AIV-H5/H9)核酸PCR試劑盒

                描述:禽liu感病毒H5/H9亞型(AIV-H5/H9)核酸PCR試劑盒是上海臻科生物科技有限公司的產品,靈敏度好,準確性高,現貨供應,歡迎廣大新老客戶前來選購。

                更新時間:2024-03-06
                產品型號:50T
                廠商性質:生產廠家
                詳情介紹

                【產品名稱】禽liu感病毒H5/H9亞型(AIV-H5/H9)核酸PCR試劑盒

                【包裝規格】 50T/盒

                【產品方法】雙重實時熒光PCR法

                【預期用途】

                適用于禽liu感病毒H5/H9亞型(AIV-H5/H9)檢測,可用于臨床禽liu感病毒H5/H9亞型(AIV-H5/H9)感染的輔助診斷,但不作確診使用。

                禽liu感病毒H5/H9亞型(AIV-H5/H9)核酸PCR試劑盒【檢驗原理】

                本試劑盒采用TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術,設計一對禽liu感病毒H5/H9亞型(AIV-H5/H9)特異性引物,結合一條特異性探針,利用相應儀器對PCR 過程進行實時監測,實現檢測結果的定性分析,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

                【主要組成成份】

                反應液、酶液、陽性質控品、陰性質控品。

                【儲存條件及有效期】

                -20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次,有效期 12 個月。

                【適用儀器】
                ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

                【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸, 嚴禁反復凍融。

                【使用方法】 

                1 樣品處理(樣本處理區)

                1.1樣本前處理 

                血液、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

                1.2 核酸提取

                推薦采用核酸提qu或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進行核酸提取,請按照試劑說明書進行操作。

                2.試劑配制(試劑準備區) 

                根據待檢測樣本總數,設所需要的PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應管 數每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

                試劑

                RP反應液

                酶液

                用量(樣本數為N)

                20μL

                1μL

                將混合好的測試反應液分裝到PCR 反應管中,21μL/管。

                3.加樣(樣本處理區) 

                將步驟1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短 暫離心。

                4.PCR 擴增(核酸擴增區)

                4.1將待檢測反應管置于熒光定量PCR 儀反應槽內;

                4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為25μL; 熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

                4.3推薦循環參數設置:

                步驟

                循環數

                溫度

                時間

                收集熒光信號

                1

                1cycle

                42℃

                20min

                2

                1cycle

                95℃

                10min

                3

                40cycles

                94℃

                15sec


                55℃

                30sec

                5.結果分析判定

                5.1結果分析條件設定 

                設置Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像 調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

                5.2結果判斷

                陽性:檢測通道Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線; 可疑:檢測通道 35值≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35值≤38,且曲線有明顯的增長曲線, 判定為陽性,否則為陰性; 陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

                6.質控標準

                 陰性質控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示; 陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

                7.檢測方法的局限性 

                1. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;

                2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;

                3. 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;

                4. 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;

                5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;

                6.試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果; 7.本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

                【注意事項】

                1.所有操作嚴格按照說明書進行;

                2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完quan混勻并短暫離心;

                3.反應液應避光保存;

                4.反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

                5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

                6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

                7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

                8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

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